卵黄抗体存在的问题及开发前景的可行性研究

第一节 卵黄抗体的概念

从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，是一种具有较强免疫功能的蛋白质，多为IgG。禽类免疫后在其卵黄中产生的大量高纯度IgG，其对某些禽类疫病具有明显治疗和紧急预防作用。卵黄抗体是用特定抗原多次免疫产蛋母鸡，使机体产生相应的特异性抗体，并转移、贮存在卵黄中，经提取纯化的免疫球蛋白卵黄抗体（Eggyolk antibodies eyAb），也称卵黄免疫球蛋白(Eggyolkimmunogbhin，IgY) 。（可行性研究）

第二节 卵黄抗体的分离提纯方法

卵黄中的主要成分是蛋白质和脂肪，其比例为1：2。大部分蛋白质都是脂蛋白，存在于卵黄颗粒中，不溶于水，只有卵黄球蛋白(α、β、γ)是水溶性的，而IgY是γ卵黄球蛋白。因此IgY的分离纯化首先需要有效地去除卵黄中的脂类，从水溶性蛋白中分离IgY。

多年来，已建立了许多较为高效而经济的方法，这些方法大多以PEG、硫酸葡聚糖、天然胶，如藻酸钠、角叉聚糖或乙醇沉淀等方法初步纯化蛋白质。

1980年，Polson首先提出聚乙二醇(PEG)两步沉淀法，分别用终浓度为3.5%和12%的PEG分步沉淀，用硫酸铵盐析法去除PEG。1985年，在此基础上提出了冷乙醇沉淀的改进方法，使产量提高，而且能有效地去除残留PEG。1981年Jensensius等提出了硫酸葡聚糖沉淀法(DS法)，PEG法和DS法的产量相当，但提取的IgY制品含有一定量的杂蛋白。Bade和Stegemann(1984)用预冷的丙烷和丙酮(-20℃)沉淀蛋白质并去除脂质，经DEAE柱层析进一步纯化，其IgY抗体活性与用Polson法提纯的IgY之间无明显差别，且稳定性好，经3次以上冻融，抗体活性未见改变。1992年Akita等用水稀释法(WD)提纯IgY，每个卵黄可获得100mg以上的IgY。此后，Akita等比较了WD法、PEG法、DS法和黄原胶法(Xanthan法)的提纯效果，结果表明：WD法产量最高，其次为DS法，WD法更适合大规模生产。

1993年，Horikoshi提出了冷乙醇分级离心的方法，分别用60%、30%、25%的冷乙醇沉淀离心，得到纯度达99%以上的IgY。此法适用于大规模制备IgY。

工业上大规模生产IgY的方法有：超临界二氧化碳气体抽提法、卡拉胶法、硫酸铵盐析法。

第三节 卵黄抗体的优点和存在的问题

母鸡易于饲养，费用不高，为制备大剂量抗体提供了经济可行的丰富资源；无需采血．只需收集免疫母鸡产下的蛋即可获得抗体．对鸡体无损伤，且符合现代动物保护规则：使用少量的抗原免疫禽类既可获得大量的质量均一的特异性卵黄抗体：由于种系发育距离相差很大，禽类卵黄抗体与哺乳动物免疫球蛋白之间不会发生交叉血清学反应；不激活哺乳动物的补体系统。不与蛋白A、G和Fc受体相结合，避免在免疫检测过程中产生假阴性或假阳性结果；卵黄抗体特异性聚集在卵黄．无IgA，IgM干扰；耐热、耐酸，巴氏灭菌温度下也不会失活：具有安全、高效且无公害的特点，是理想的兽医l临床药物：卵黄抗体制备方法简单。成本低，使用方便且不受时间、地域和季节的限制。

卵黄是良好的微生物培养基，卵黄内含有支原体、沙门氏菌、腺病毒及呼肠孤病毒等可以垂直传播给雏鸡的病原。对制品中可能带有的病原微生物的灭活技术不过关，可造成一些疾病的传播。在卵黄抗体的萃提精制过程中，既要保证抗体生化结构的完整和生物活性，又要彻底去除垂直传播病原，特别是如何保持口服抗体的活性成为亟待解决的一个问题。生产卵黄抗体没有统一的质量标准，没有规范的操作规程，没有用于监测的质量标准。用于制备禽用抗体所选用的商品用家禽自身的抗体水平不， 影响到卵黄抗体的效价水平。使用该类禽蛋制备的卵黄抗体时，常对正常的免疫发生干扰作用。另外由于卵黄抗体十分黏稠，所以注射困难、吸收慢，在注射部位易形成干酪样物质、肿大或坏死等，影响抗体的作用及商品外观。目前国内制品大多为液态，与微生态制剂混合后会产生腐败现象，其生产工艺是通过冷冻干燥技术提取抗体，大大增加了生产成本。因此该类产品质量有待于进一步提高，产品性状有待改善。如能应用高免蛋纯化卵黄抗体，将它制成精制抗体或干粉抗体，同时寻找降低成本的制备方法，则可发挥其优势，具有很广阔的应用前景。

第四节 卵黄抗体的开发前景

IgY作为替代抗生素的新型饲料添加剂正在引起人们的关注，IgY取代抗生素用作生长促进剂，不会产生药物残留，是一种安全的绿色添加剂。

生产技术较为成熟：用鸡卵黄大量生产、制备多克隆抗体是近年来抗体制备技术中新兴的研究领域。
IgY产量高，价格低廉。

使用IgY技术生产免疫球蛋白，可以减少对动物的应激，提高动物的福利。

年龄较大的动物会导致IgY分解失活，然而通过包埋处理可避免这一问题。Shimizu等(1993)用脂质体包埋IgY，在pH2.8的胃蛋白酶中37℃温育1h，包埋的IgY仍可保存80%的活性。

综上所述，鸡卵黄免疫球蛋白是一种高产、优质的多克隆抗体，而且鸡大规模工业化饲养成本低，经济方便，同时制备IgY的工艺相对简单。应用卵黄抗体防治疾病也有不可避免的缺点，如可能带有蛋传染性疾病的病原，对养禽业存在潜在的威胁。

免责申明：本文仅为中经纵横市场研究观点，不代表其他任何投资依据或执行标准等相关行为。如有其他问题，敬请来电垂询：4008099707。特此说明。