BSA的作用及制备方法的可研报告

第一节 BSA的定义

牛血清白蛋白（BSA），又称第五组分，是牛血清中的一种白蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。（可研报告）

第二节 BSA的作用

1.BSA是酶的稳定剂，防止酶的分解和非特异性吸附；

2.BSA能减轻有些酶的变性，能减轻有些不利环境因素如加热，表面张力及化学因素引起的变性的至于作用机理我不是很清楚，可能是因为它结构中有17个二硫键，和一个巯基，巯基的化学反应很活泼，二硫键有抗氧化还原的作用，因此可与多种阳离子，阴离子和小分子结合；

3.BSA能防止酶吸附到管壁而损失。

BSA一般做为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中，因为有些酶在低浓度下不稳定或活性低。加入BSA后，它可能起到“保护”或“载体”作用，不少酶类添加 BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不会受到什么影响。对多数底物DNA而言，BSA可以使酶切更完全，并可实现重复切割。在37℃，酶切反应超过1h时，BSA可以使酶更加稳定，因为在不含BSA的反应缓冲液中，许多限制性内切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的时间。而BSA可以结合缓冲液或底物DNA中抑制限制性内切酶活性的金属离子和其它化学物质。

第三节 BSA的制备方法

牛血清白蛋白Albumin from bovine serum,BSA，又称为 组分V，或Cohn V，名称起源于BSA最早的分馏法Cohn 冷乙醇法，Cohn法仍然是目前非常普遍的BSA分馏法，除了了冷乙醇法，目前最主要的还有热休克法和色谱层析法。

一、Cohn 冷乙醇法

Cohn 冷乙醇法最早是由哈佛大学Edwin Cohn教授于1946年发明的，基于战争创伤治疗对注射级别的蛋白的大规模需求，Cohn教授在较低的温度下改变血浆的乙醇浓度和PH值，使其所含蛋白在不同的乙醇浓度下析出，在第五个析出的组分中主要成分即为BSA，所以BSA又称组分V或Cohn V。

Cohn 法是最早的BSA分馏法，为后续的BSA分馏提供了重要的思路，但是Cohn法过程中血浆蛋白涉及乙醇和低PH酸变性，以及多种杂蛋白干扰，所以分馏的BSA的质量上差强人意，相比其他更先进的分馏法，存在许多问题：

BSA蛋白变性,片段化，活性低；

BSA纯度较低，杂质含量高；

BSA产量低；

适用一般实验，很难用于细胞培养。

二、热休克法

Cohn 法为大规模生产BSA提供了思路，但是因为涉及临床使用，生产的BSA需要进行肝炎病毒灭活，血浆在9%乙醇和PH6.5的时候加热至68度；热休克法一般需要添加辛酸最大程度维持BSA不被变性。

热休克法生产的BSA产量最高，纯度也高，逐渐取代Cohn法成为BSA分馏主要方法，但是热休克法BSA也有一些缺陷：

BSA蛋白高温变性，活性低；

辛酸对细胞有损伤，不适合细胞培养；

纯度低，加热会产生很多变性BSA多聚体和一些片段化BSA，同时也会产生很多其他变性蛋白。

三、色谱层析法

色谱层析法Chromatographic法是目前BSA生产最为先进的方法，也是最为温和的方法；起于生产人血清白蛋白用于临床治疗，主要包括三个步骤，超滤，离子交换色谱层析和硫酸铵沉淀；整个过程，无加热，无乙醇，无辛酸，最温和的方法，最大程度保护BSA自然结构和功能，生产的BSA结构完整单体，绝不变性，活力最强，纯度最高，无杂质，最适合细胞培养，MP位于世界上最为纯净的血源地-新西兰，生产BSA超过15年历史，用于胚胎移植，大批量生产BSA。

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